產(chǎn)品簡(jiǎn)介：

    碧云天生產(chǎn)的顯色法TUNEL細(xì)胞凋亡檢測(cè)試劑盒(Colorimetric TUNEL Apoptosis Assay Kit)為您提供了一種高靈敏度又快速簡(jiǎn)便的細(xì)胞凋亡檢測(cè)方法。對(duì)于待檢測(cè)的細(xì)胞或組織樣品，經(jīng)過(guò)生物素標(biāo)記和后續(xù)的DAB顯色等步驟，即可在普通光學(xué)顯微鏡下觀察到凋亡細(xì)胞。
    細(xì)胞在發(fā)生凋亡時(shí)，會(huì)激活一些DNA內(nèi)切酶，這些內(nèi)切酶會(huì)切斷核小體間的基因組DNA。細(xì)胞凋亡時(shí)
抽提DNA進(jìn)行電泳檢測(cè)，可以發(fā)現(xiàn)180-200bp的DNA ladder?；蚪MDNA斷裂時(shí)，暴露的3'-OH可以在末端脫氧核苷酸轉(zhuǎn)移酶(Terminal Deoxynucleotidyl Transferase,TdT)的催化下加上生物素(Biotin)標(biāo)記的dUTP(Biotin-dUTP)，隨后和辣根過(guò)氧化物酶(HRP)標(biāo)記的Streptavidin (Streptavidin-HRP)結(jié)合，最后在HRP的催化下通過(guò)DAB顯色來(lái)顯示凋亡細(xì)胞，從而可以通過(guò)普通光學(xué)顯微鏡檢測(cè)到凋亡的細(xì)胞，這就是TUNEL(TdT-mediated dUTP Nick-End Labeling)法檢測(cè)細(xì)胞凋亡的原理。
    本試劑盒有如下優(yōu)點(diǎn)。(1)高靈敏度：背景染色極低，陽(yáng)性染色強(qiáng)，可以在單細(xì)胞水平檢測(cè)到細(xì)胞凋亡，同時(shí)由于凋亡早期就有 DNA斷裂，可以檢測(cè)到早期的細(xì)胞凋亡。(2)特異性好：TUNEL檢測(cè)時(shí)通常更
容易標(biāo)記凋亡細(xì)胞，而不容易標(biāo)記壞死細(xì)胞。(3)快速：僅需約2-3個(gè)小時(shí)即可完成。(4)應(yīng)用范圍廣：可以用于檢測(cè)冷凍或石蠟切片中的細(xì)胞凋亡情況，也可以檢測(cè)培養(yǎng)的貼壁細(xì)胞或懸浮細(xì)胞的凋亡情況。
    TUNEL法特異性檢測(cè)細(xì)胞凋亡時(shí)產(chǎn)生的DNA斷裂，但不會(huì)檢測(cè)出射線等誘導(dǎo)的DNA斷裂(和細(xì)胞凋亡時(shí)
的斷裂方式不同)。這樣一方面可以把凋亡和壞死區(qū)分開(kāi)，另一方面也不會(huì)把射線等誘導(dǎo)發(fā)生DNA斷裂的非凋亡細(xì)胞判斷為凋亡細(xì)胞。
    極少數(shù)細(xì)胞凋亡時(shí)沒(méi)有DNA斷裂，此時(shí)不適用TUNEL法檢測(cè)。在個(gè)別類型的壞死細(xì)胞中也發(fā)現(xiàn)TUNEL檢測(cè)呈陽(yáng)性。在需要嚴(yán)格判斷細(xì)胞凋亡的情況下，最好同時(shí)檢測(cè)多個(gè)凋亡指標(biāo)。
    本試劑盒足夠檢測(cè)50個(gè)樣品。
包裝清單：

保存條件：
    -20℃保存，DAB顯色液A和DAB顯色液B需避光保存。
注意事項(xiàng)：
    需自備用于洗滌細(xì)胞的PBS或HBSS，用于封片的抗熒光淬滅封片液(P0126)等適當(dāng)?shù)姆馄?，用于?br/>定的4%多聚甲醛或向碧云天訂購(gòu)免疫染色固定液(P0098)，同時(shí)需自備含0.1% Triton X-100的PBS或向碧云天訂購(gòu)免疫染色洗滌液(P0106)。 需自備過(guò)氧化氫，除石蠟切片外需自備甲醇。
    如果用于石蠟切片的檢測(cè)，需自備蛋白酶K和二甲苯。蛋白酶K(ST533)可以向碧云天訂購(gòu)。
    本產(chǎn)品僅限于專業(yè)人員的科學(xué)研究用，不得用于臨床診斷或治療，不得用于食品或藥品，不得存放于普通住宅內(nèi)。
    為了您的安全和健康，請(qǐng)穿實(shí)驗(yàn)服并戴一次性手套操作。

使用說(shuō)明：
1. 對(duì)于貼壁細(xì)胞或細(xì)胞涂片：
   a. 用PBS或HBSS洗滌1次。
   b. 如果細(xì)胞貼得不牢，可以干燥樣品使細(xì)胞貼得更牢。
   c. 用4%多聚甲醛或碧云天生產(chǎn)的免疫染色固定液(P0098)固定細(xì)胞30-60分鐘。
   d. 用PBS或HBSS洗滌1次。
   e. 加入含0.1% Triton X-100的PBS或碧云天生產(chǎn)的免疫染色洗滌液(P0106)，冰浴孵育2分鐘。
   f. 用PBS或HBSS洗滌1次。
   g. 再用甲醇配制的0.3%過(guò)氧化氫溶液(0.3% H₂O₂ in Methanol)中室溫孵育20分鐘，以滅活切片內(nèi)源
      的過(guò)氧化物酶。隨后用PBS或HBSS洗滌3次。
   h. 轉(zhuǎn)步驟5。
2. 對(duì)于懸浮細(xì)胞或細(xì)胞懸液：
   a. 收集細(xì)胞(不超過(guò)200萬(wàn)細(xì)胞)，用PBS或HBSS洗滌1次。
   b. 涂片，使細(xì)胞粘附在載玻片上?？梢愿稍飿悠肥辜?xì)胞貼得更牢，或使用適當(dāng)?shù)恼掣皆噭?br/>    c. 用4%多聚甲醛或碧云天生產(chǎn)的免疫染色固定液(P0098)固定細(xì)胞30-60分鐘。
   d. 用PBS或HBSS洗滌1次。
   e. 用含0.1% Triton X-100的PBS或碧云天生產(chǎn)的免疫染色洗滌液(P0106)重懸細(xì)胞，冰浴孵育2分
      鐘。
   f. 用PBS或HBSS洗滌1次。
   g. 再用甲醇配制的0.3%過(guò)氧化氫溶液(0.3% H₂O₂ in Methanol)中室溫孵育20分鐘，以滅活切片內(nèi)源
      的過(guò)氧化物酶。隨后用PBS或HBSS洗滌3次。
   h. 轉(zhuǎn)步驟5。
3. 對(duì)于石蠟切片：
   a. 二甲苯中脫蠟5-10分鐘。換用新鮮的二甲苯，再脫蠟5-10分鐘。無(wú)水乙醇5分鐘。90%乙醇2分鐘。
      70%乙醇2分鐘，蒸餾水2分鐘。
   b. 滴加20μg/ml不含DNase的蛋白酶K，20-37℃作用15-30分鐘(不同組織的最佳作用溫度和時(shí)間需自
      行摸索)。
   c. 用PBS或HBSS洗滌3次。注意：這一步必須把蛋白酶K洗滌干凈，否則會(huì)嚴(yán)重干擾后續(xù)的標(biāo)記反應(yīng)。
   d. 再用PBS配制的3%過(guò)氧化氫溶液(3% H₂O₂ in PBS)中室溫孵育20分鐘，以滅活切片內(nèi)源的過(guò)氧化物
      酶。隨后用PBS或HBSS洗滌3次。注：請(qǐng)勿在用PBS配制的3%過(guò)氧化氫溶液中孵育過(guò)長(zhǎng)時(shí)間，否則會(huì)
      出現(xiàn)過(guò)氧化氫導(dǎo)致的DNA斷裂，從而產(chǎn)生假陽(yáng)性。
   e. 轉(zhuǎn)步驟5。
4. 對(duì)于冷凍切片：
   a. 用4%多聚甲醛或碧云天生產(chǎn)的免疫染色固定液(P0098)固定細(xì)胞30-60分鐘。
   b. PBS或HBSS洗滌2次，每次10分鐘。
   c. 加入含0.1% Triton X-100的PBS或碧云天生產(chǎn)的免疫染色洗滌液(P0106)，冰浴孵育2分鐘。
   d. 再用甲醇配制的0.3%過(guò)氧化氫溶液(0.3% H₂O₂ in Methanol)中室溫孵育20分鐘，以滅活切片內(nèi)源
      的過(guò)氧化物酶。隨后用PBS或HBSS洗滌3次。
   e. 轉(zhuǎn)步驟5。
5. 配制生物素標(biāo)記液：
   參考下表配制適量的生物素標(biāo)記液，需充分混勻。注意：配制好的生物素標(biāo)記液必須一次使用完
   畢，不宜凍存。