產(chǎn)品簡介：

    Annexin V-PE細胞凋亡檢測試劑盒(Annexin V-PE Apoptosis Detection Kit)是用PE
(Phycoerythrin)標記的重組人Annexin V來檢測細胞凋亡時出現(xiàn)在細胞膜表面的磷酯酰絲氨酸的一種細胞凋亡檢測試劑盒?？梢允褂昧魇郊毎麅x、熒光顯微鏡或其它熒光檢測設備進行檢測。
    本試劑盒檢測的是紅色熒光，因此在待檢測的細胞已經(jīng)表達GFP等綠色熒光蛋白的情況下，特別適合使用本試劑盒檢測細胞凋亡。PE可以被495nm、545或564nm的激發(fā)光所激發(fā)，發(fā)出峰值為575nm的熒光。(參考圖1)
          
                                   圖1.Phycoerythrin的熒光光譜
    Annexin是一類廣泛分布于真核細胞細胞漿內(nèi)鈣離子依賴的磷酯結合蛋白，參與細胞內(nèi)的信號轉導。但僅Annexin V被報道可以調控一些PKC的活性。
    Annexin V選擇性結合磷酯酰絲氨酸(phosphatidylserine，簡稱PS)。磷酯酰絲氨酸主要分布在細胞膜內(nèi)側，即與細胞漿相鄰的一側。在細胞發(fā)生凋亡的早期，不同類型的細胞都會把磷酯酰絲氨酸外翻到細胞表面，即細胞膜外側。磷酯酰絲氨酸暴露到細胞表面后會促進凝血和炎癥反應。而Annexin V和外翻到細胞表面的磷酯酰絲氨酸結合后可以阻斷磷酯酰絲氨酸的促凝血和促炎癥反應活性。
    用帶有紅色熒光的熒光探針PE標記的Annexin V，即Annexin V-PE，就可以用流式細胞儀或熒光顯微鏡非常簡單而直接地檢測到磷酯酰絲氨酸的外翻這一細胞凋亡的重要特征。
    正常細胞不會被Annexin V-PE所染色，凋亡細胞和壞死細胞都會被Annexin V-PE所染色。如果希望進一步區(qū)分凋亡和壞死細胞，可以使用其它細胞凋亡檢測試劑盒進行檢測。
    一個包裝的本試劑盒共可以檢測20個樣品。
包裝清單：

保存條件：
    4℃保存，半年有效。AnnexinV-PE需避光保存。Annexin V-PE結合液可-20℃長期保存。
注意事項：
    如果有細菌或真菌污染，會嚴重影響檢測效果。
    染色后宜盡快檢測，時間過長可能會導致凋亡或壞死細胞的數(shù)量增加。
    如果細胞收集過程中使用了胰酶，需注意設法去除殘留的胰酶。殘留的胰酶會消化并降解Annexin
V-FITC，最終導致染色失敗。
    熒光物質均易發(fā)生淬滅，在進行熒光觀察時，盡量縮短觀察時間，同時在操作和存放過程中也盡量注意避光保存。
    需自備PBS。
    本產(chǎn)品僅限于專業(yè)人員的科學研究用，不得用于臨床診斷或治療，不得用于食品或藥品，不得存放于普通住宅內(nèi)。
    為了您的安全和健康，請穿實驗服并戴一次性手套操作。

使用說明：
1. 對于懸浮細胞：
   A. 在進行完細胞凋亡刺激后，1000g (約1000-2000rpm)離心5分鐘，棄上清，收集細胞，用PBS輕輕
      重懸細胞并計數(shù)。注意：PBS重懸不能省略，PBS重懸的過程同時也起到了洗滌細胞的作用，可以
      保證后續(xù)Annexin V-PE的結合。
   B. 取5-10萬重懸的細胞，1000g離心5分鐘，棄上清，加入195μl Annexin V-PE結合液輕輕重懸細
      胞。
   C. 加入5μl Annexin V-PE，輕輕混勻。
   D. 室溫(20-25℃)避光孵育10-20分鐘，隨后置于冰浴中?？梢允褂娩X箔進行避光。孵育過程中可以
      重懸細胞2-3次以改善標記效果。
   E. 隨即進行流式細胞儀檢測，Annexin V-PE為紅色熒光。如果用于熒光顯微鏡下檢測，1000g離心5
      分鐘，收集細胞，用50-100μl Annexin V-PE結合液輕輕重懸細胞，涂片后，熒光顯微鏡下觀
      察。
2. 對于貼壁細胞：
   A. 把細胞培養(yǎng)液吸出至一合適離心管內(nèi)，PBS洗滌貼壁細胞一次，加入適量胰酶細胞消化液(可含有
      EDTA)消化細胞。室溫孵育至輕輕吹打可以使貼壁細胞吹打下來時，吸除胰酶細胞消化液。需避免
      胰酶的過度消化。
   B. 加入步驟2A中收集的細胞培養(yǎng)液，稍混勻，轉移到離心管內(nèi)，1000g離心5分鐘，棄上清，收集細
      胞，用PBS輕輕重懸細胞并計數(shù)。注意：加入步驟2A中的細胞培養(yǎng)液一方面可以收集已經(jīng)懸浮的發(fā)
      生凋亡或壞死的細胞，另一方面細胞培養(yǎng)液中的血清可以有效抑制或中和殘留的胰酶；殘留的胰
      酶會消化并降解后續(xù)加入的Annexin V-FITC導致染色失敗。
   C. 取5-10萬重懸的細胞，1000g離心5分鐘，棄上清，加入195μl Annexin V-PE結合液輕輕重懸細
      胞。
   D. 加入5μl Annexin V-PE，輕輕混勻。
   E. 室溫(20-25℃)避光孵育10-20分鐘，隨后置于冰浴中?？梢允褂娩X箔進行避光。孵育過程中可以
      重懸細胞2-3次以改善標記效果。
   G. 隨即進行流式細胞儀檢測，Annexin V-PE為紅色熒光。如果用于熒光顯微鏡下檢測，1000g離心5
      分鐘，收集細胞，用50-100μl Annexin V-PE結合液輕輕重懸細胞，涂片后，熒光顯微鏡下觀
      察。
3. 對于貼壁細胞的原位熒光顯微鏡檢測：
   注：本方法的優(yōu)點是可以原位觀察細胞凋亡，缺點是部分凋亡由于不貼壁而檢測不到。
   A. (選做)如果條件許可，把細胞培養(yǎng)于24孔板、48孔板或96孔板內(nèi)。在凋亡誘導結束后，用可以對
      多孔板進行離心的離心機1000g離心5分鐘。
   B. 吸除細胞培養(yǎng)液，加入PBS洗滌一次。(如果條件許可，在吸除PBS前1000g離心5分鐘。)
   C. 加入195μl Annexin V-PE結合液。
   D. 加入5μl Annexin V-PE，輕輕混勻。
   E. 室溫(20-25℃)避光孵育10-20分鐘?？梢允褂娩X箔進行避光。
   F. 隨即在熒光顯微鏡下觀察，Annexin V-PE為紅色熒光。