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CRISPR/Cas9基因敲除細胞株（多克?。?br style="" class="">CRISPR/Cas9敲除技術(shù)

       CRISPR/Cas9敲除技術(shù)的原理是Cas9結(jié)合到sgRNA上，sgRNA的引導序列與基因組DNA中的靶標序列結(jié)合，Cas9切割靶標序列產(chǎn)生雙鏈斷裂，迫使細胞進行緊急修復，通常條件下，細胞偏向于使用非同源末端連接（NHEJ：nonhomologous DNA end joining）的方式對斷裂的雙鏈進行修復，從而造成靶位點基因的插入或缺失突變，發(fā)生移碼突變可以完全敲除目標蛋白。
CRISPR/Cas9基因敲除技術(shù)是繼TALEN基因敲除技術(shù)之后又一大突破，具有操作簡便，周期短，敲除效率高，作用靶點多，無基因、細胞及物種限制，目的基因的大小不受限制，不受轉(zhuǎn)錄本數(shù)量影響等優(yōu)勢，逐漸成為基因敲除的標準操作工具。
 

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1、針對敲除目的基因設(shè)計合適的靶點，構(gòu)建3個CRISPR/Cas9敲除質(zhì)粒并測序驗證。
2、分別將3個CRISPR/Cas9敲除質(zhì)粒轉(zhuǎn)染293T細胞，利用T7EⅠ試驗篩選出編輯效率最高的CRISPR/Cas9敲除質(zhì)粒。
3、用編輯效率最高的CRISPR/Cas9敲除質(zhì)粒包裝慢病毒，并且檢測慢病毒的滴度。
4、用慢病毒感染目的細胞，抗性篩選獲得CRISPR/Cas9敲除多克隆細胞。
5、利用T7EⅠ試驗檢測CRISPR/Cas9敲除多克隆細胞的編輯率。

客戶提供信息

 

1、待敲除目的基因的名稱和編號(gene ID)。
2、需構(gòu)建敲除株的細胞信息。

實驗結(jié)果交付

 

1. CRISPR/Cas9敲除多克隆細胞。

2. CRISPR/Cas9敲除質(zhì)粒。

3. CRISPR/Cas9敲除質(zhì)粒的序列，酶切鑒定、測序結(jié)果。

4. T7EⅠ試驗檢測結(jié)果。

5. 說明實驗過程中所用的耗材、儀器設(shè)備和操作過程的實驗報告一份。
 

服務周期：2-3個月。

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注：該產(chǎn)品未在中華人民共和國食品藥品監(jiān)督管理部門申請醫(yī)療器械注冊和備案，不可用于臨床診斷或治療等相關(guān)用途