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技術(shù)優(yōu)勢(shì)
(1)高效蛋白提取液進(jìn)行高質(zhì)量蛋白的提取,同時(shí)高效的蛋白酶抑制劑有效防止蛋白的降解及去磷酸化等作用;
(2)科維創(chuàng)生物擁有多年的Western Blot檢測(cè)經(jīng)驗(yàn),為客戶(hù)提供專(zhuān)業(yè)的技術(shù)服務(wù)。
(3)科維創(chuàng)生物為客戶(hù)設(shè)置預(yù)實(shí)驗(yàn),根據(jù)客戶(hù)樣品具體情況摸索最適上樣量和抗體最適稀釋度。
樣品要求
客戶(hù)需提供新鮮或正確保存的蛋白樣品或者蛋白提取液,陽(yáng)性對(duì)照樣品(細(xì)胞或組織), 檢測(cè)目的蛋白的一抗(或由漢恒生物代購(gòu))。樣品要求為:
1、細(xì)胞不少于5×106個(gè);
2、組織樣品不少于50mg;
3、總蛋白濃度不低于 2μg/μl(至少50μl)。
實(shí)驗(yàn)內(nèi)容
1、蛋白提取和定量(如果提供蛋白樣品,則直接電泳預(yù)實(shí)驗(yàn)檢測(cè)抗體特異性);
2、SDS-PAGE 10-15% 變性聚丙烯酰胺凝膠電泳;
3、轉(zhuǎn)膜(PVDF膜);
4、封閉(5%脫脂奶粉);
5、一抗孵育(其中內(nèi)參基因?yàn)門(mén)ubulin、GAPDH或Actin);
6、二抗孵育(如果由于材料降解或一抗造成實(shí)驗(yàn)無(wú)法繼續(xù),則收取相關(guān)預(yù)實(shí)驗(yàn)費(fèi)用);
7、顯色(ECL);
8、曝光、洗片、分析。
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