一、ELISA服務介紹 
 
ELISA(Enzyme-linked Immunosorbnent assay)酶聯免疫吸附試驗是利用蛋白和聚苯乙烯表面疏水吸附的特性，將抗原-抗體特異性結合反應固定于固相載體表面進行，同時結合酶對底物的高效率催化作用而產生高靈敏的檢測效果。ELISA實驗用于定量測定，可以有效檢測出濃度為pg/L級的待測物。ELISA實驗是一種靈敏高效的體外檢測手段，廣泛用于研究和體外診斷。
 

 
ELISA實驗原理圖

 
二、ELISA服務內容
 
方法一：用于檢測未知抗原的雙抗體夾心法：

1.包被：用0.05 M pH9的碳酸鹽包被緩沖液將抗體稀釋至蛋白質含量為1～10 μg/mL，在每個聚苯乙烯板的反應孔中加0.1 mL，4°C過夜。次日，棄去孔內溶液，用洗滌緩沖液洗3次，每次3分鐘；

2.加樣：加一定稀釋的待檢樣品0.1 mL于上述已包被之反應孔中，置于37℃孵育1小時，然后洗滌（同時做空白孔，陰性對照孔及陽性對照孔）；

3.加酶標抗體：于各反應孔中，加入新鮮稀釋的酶標抗體（經滴定后的稀釋度）0.1 mL，37°C孵育0.5～1小時，洗滌；

4.加底物液顯色：于各反應孔中加入臨時配制的TMB底物溶液0.1 mL，37℃ 10～30分鐘；

5.終止反應：于各反應孔中加入2 M硫酸0.05 mL；

6.結果判定：可于白色背景上，直接用肉眼觀察結果，反應孔內顏色越深，陽性程度越強，陰性反應為無色或極淺，依據所呈顏色的深淺，以“+”、“-”號表示；也可測OD值，在ELISA檢測儀上，于450 nm（若以ABTS顯色，則410 nm）處，以空白對照孔調零后測各孔OD值，若大于規(guī)定的陰性對照OD值的2.1倍，即為陽性。

方法二：用于檢測未知抗體的間接法：

用包被緩沖液將已知抗原稀釋至1～10 μg/mL，每孔加0.1ml，4℃過夜。次日洗滌3次。加一定稀釋的待檢樣品（未知抗體）0.1 mL于上述已包被之反應孔中，置37℃孵育1小時，洗滌。（同時做空白、陰性及陽性孔對照）于反應孔中，加入新鮮稀釋的酶標第二抗體（抗抗體）0.1 mL，37°C孵育30～60分鐘，洗滌，最后一遍用DDW洗滌。其余步驟同“雙抗體夾心法”的4、5、6。
 

三、ELISA服務說明
 
1.    本實驗可以檢測以下樣本：

1) 血清：在室溫自然凝固后，離心20分鐘（2000-3000 rpm），收集上清。
2) 血漿：根據具體的實驗目的選擇EDTA，檸檬酸鈉或肝素作為抗凝劑，混合10-20分鐘后離心20分鐘（2000-3000 rpm），取上清進行實驗。
3) 尿液、腦脊液等：使用無菌收集管，離心20分鐘（2000-3000 rpm）。仔細收集上清完成實驗。
4) 細胞培養(yǎng)上清：如果分泌成分在培養(yǎng)基中，可以直接檢測上清。如果待測是細胞，應仔細收集細胞，通過反復凍融釋放出細胞內成分，離心取上清進行檢測。
5) 組織標本：切取標本后稱重，加入一定量的PBS或組織蛋白萃取試劑，并加入蛋白酶抑制劑，充分勻漿。離心20分鐘左右（ 2000-3000 rpm），收集上清置于-20℃或-80℃ 保存。如有必要，可將樣品濃縮干燥，分裝后一份待檢測，其余冷凍備用。
 
2.樣本保存及傳遞：

1）3天內測定的標本可放置在4°C，否則需低溫凍存運輸。
2）周期批量收集的樣本即使分裝后放在-20°C或-80°C中保存，避免反復凍融。注：2-8 °C可保存 72小時，-20 °C 可保存1個月。-80 °C可保存6個月。
 
3.實驗周期：實驗周期一般在收到樣品后7-14個工作日；

4.若另有疑問歡迎向本公司咨詢，我們將竭誠為您服務。
 

四、質量承諾
 
1.權威的ELISA實驗結果報告及結果分析（本公司承諾檢測結果準確、客觀、可信，但不保證得到某一特定結果。）；
2.真實的原始實驗數據；
3.詳細的實驗步驟。

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注：該產品未在中華人民共和國食品藥品監(jiān)督管理部門申請醫(yī)療器械注冊和備案，不可用于臨床診斷或治療等相關用途