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產(chǎn)品簡介
Elabscience?自主研發(fā)的Annexin V-AF647染色液用于鑒定凋亡和壞死細(xì)胞。
Annexin V是一種鈣離子依賴性磷脂結(jié)合蛋白,與磷脂酰絲氨酸PS 有高度親和力,可通過細(xì)胞外側(cè)暴露的PS 與凋亡早期細(xì)胞胞膜結(jié)合,將Annexin V標(biāo)記熒光染料AF647利用流式細(xì)胞儀或熒光顯微鏡可檢測細(xì)胞凋亡。
Annexin V搭配PI或7-AAD、DAPI等DNA染色液使用,可區(qū)分處于不同凋亡時期的細(xì)胞。
試劑組成
產(chǎn)品編號 | 產(chǎn)品名稱 | 50T | 100T | 200T | 500T | Storage |
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E-CK-A113 | Annexin V-AF647 Reagent[113] | 250 μL | 500 μL | 1 mL | 1.25 mLx2 | 2~8°C |
說明書 | 一份 |
本試劑搭配DAPI檢測喜樹堿誘導(dǎo)的Jurkat細(xì)胞凋亡效果如下圖所示:
Jurkat細(xì)胞用5 μM喜樹堿(Camptothecin) (左) 或未加藥 (右) 處理4 h,本試劑搭配DAPI染色后,流式細(xì)胞儀熒光檢測。Annexin V-AF647單陽細(xì)胞為早期凋亡細(xì)胞,Annexin V-AF647和DAPI雙陽細(xì)胞為壞死或晚期凋亡細(xì)胞,DAPI單陽細(xì)胞為裸核細(xì)胞。
實驗步驟
1. 細(xì)胞按照實驗方案進(jìn)行凋亡誘導(dǎo),300 g離心5 min,棄上清,收集細(xì)胞,PBS洗滌一次,輕輕重懸細(xì)胞并計數(shù)。
注:本品僅在懸浮培養(yǎng)的細(xì)胞中驗證,良好的細(xì)胞狀態(tài)是實驗的關(guān)鍵。貼壁生長的細(xì)胞用于凋亡檢測時,可能會因為胰酶消化、吹打等處理導(dǎo)致細(xì)胞的壞死或凋亡,對實驗結(jié)果可能存在不可控的影響,請謹(jǐn)慎處理。
2. 取1~5 × 105重懸的細(xì)胞,300 g離心5 min,棄上清。用PBS洗滌細(xì)胞一次,離心后棄上清,加入500 μL稀釋的1 × Annexin V Binding Buffer工作液重懸細(xì)胞。
3. 細(xì)胞懸液中加入5 μL的Annexin V-AF647染色液和5 μL的細(xì)胞核DNA染色液。
4. 輕柔渦旋混勻后,室溫避光孵育15~20 min。
5. 反應(yīng)完成后立即上機(jī)檢測。如不能及時檢測,請于冰上避光靜置并于1小時內(nèi)完成檢測。
保存條件
2~8°C可保存1年。Annexin V-AF647染色液需要避光保存。
注意事項
1.保質(zhì)期1年,為獲得最佳使用效果,請在3~6個月內(nèi)使用,Annexin V-AF647禁止冷凍保存。
2.染色后宜盡快檢測,時間過長可能會導(dǎo)致凋亡或壞死細(xì)胞的數(shù)量增加。
3.熒光物質(zhì)均易發(fā)生淬滅,進(jìn)行熒光觀察時,盡量縮短觀察時間,操作和存放過程盡量注意避光保存。
4.為了您的安全和健康,請穿實驗服并戴一次性手套操作。