DNA磷酸化試劑盒

描述實驗步驟 專題

中文名稱	DNA磷酸化試劑盒
中文同義詞	DNA磷酸化試劑盒
英文名稱	DNA Phosphorylating Kit
英文同義詞	DNA Phosphorylating Kit
CAS號
分子式
分子量	0
EINECS號
相關(guān)類別	分子生物試劑-克隆及表達;分子生物學-克隆及表達
Mol文件	Mol File
結(jié)構(gòu)式

DNA磷酸化試劑盒 性質(zhì)

DNA磷酸化試劑盒 用途與合成方法

描述

DNA磷酸化試劑盒能將DNA分子5′端的-OH基團磷酸化，處理后的DNA可以直接用于連接反應、克隆等，不需要純化。

人工合成的PCR引物、linker和adaptor的5′端一般都是-OH基團而不是-PO4基團（除非額外付費要求在人工合成時加上-PO4基團），而任何DNA連接酶都不能將一個DNA分子5′端的-OH基團和另一個DNA分子3′端的-OH基團進行連接，因此通過人工合成的DNA片段和天然DNA之間的連接效率一般都比天然DNA彼此的連接效率低（天然DNA 4個端口均可連接，人工合成的DNA跟天然DNA有2個端口可以連接，人工合成的DNA之間沒有任何端口可以連接），尤其是在平末端連接時。DNA磷酸化試劑盒可以快速把DNA 5′端的-OH基團變成-PO4基團，使人工合成的DNA（包括PCR產(chǎn)物）跟天然DNA一樣有高的連接效率。

實驗步驟

注意：如果是PCR產(chǎn)物，一定要先膠回收，不能使用沒經(jīng)過純化的PCR反應液，因為其中的殘留PCR引物會耗掉大量的激酶，降低PCR產(chǎn)物的磷酸化效率。

1、在微量離心管中配制下列反應液（20μL）：

成分用量

PCR膠回收片段2μL（不超過10 pmol）

10×TPK緩沖液2μL

ATP溶液（10 mM）5μL

T4多核苷酸激酶（10U/uL）1μL

超純水到20μL

2、37℃反應30分鐘。

3、70℃熱處理5分鐘，滅活酶。

4、可直接用于后續(xù)克隆（加入量不要超過總體積的1/5）。

安全信息

MSDS信息

DNA磷酸化試劑盒 上下游產(chǎn)品信息