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長期有效 |
應(yīng)用純化原理作用操作方法 專題
中文名稱 | 細菌基因組DNA快速提取試劑盒(帶蛋白酶K) |
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中文同義詞 | 細菌基因組DNA快速提取試劑盒(帶蛋白酶K) |
英文名稱 | Bacterial Genomic DNA Rapid Extraction Kit (with proteinase K) |
英文同義詞 | |
CAS號 | |
分子式 | |
分子量 | 0 |
EINECS號 | |
相關(guān)類別 | |
Mol文件 | Mol File |
結(jié)構(gòu)式 |
應(yīng)用
細菌基因組DNA快速提取試劑盒(帶蛋白酶K)用于細菌基因組DNA的小量提取。
純化原理
利用細胞裂解液裂解細胞釋放基因組DNA,由硅膠膜柱可逆吸附基因組DNA,經(jīng)蛋白酶消化、漂洗液清洗除去蛋白質(zhì)、脂質(zhì)等雜質(zhì)后,用純化液洗脫獲得基因組DNA。
作用
本產(chǎn)品可從0.5-2 ml對數(shù)生長期的菌液(不超過106–108個)中提取到3-20μg超純基因組DNA(OD260/280=1.7-1.9),此基因組DNA可直接用于酶切、PCR等后續(xù)實驗。
操作方法
1取0.5-2 ml處于對數(shù)生長期菌液,置于1.5 ml離心管中。12,000 rpm離心1min,棄上清。
2向收集到的菌體沉淀中加入200μl緩沖液DS,用漩渦振蕩器劇烈振蕩直至菌體徹底懸浮。
3加入20μl蛋白酶K溶液,混勻。
4加入220μl裂解液MS,漩渦振蕩混勻,直至形成均一的懸浮液。65℃溫浴10min。溶液應(yīng)變清亮,簡短離心以去除管蓋內(nèi)壁的水珠。
5加入220μl無水乙醇,上下顛倒混勻。此時可能出現(xiàn)絮狀沉淀,將溶液及絮狀沉淀轉(zhuǎn)移到純化柱中。12,000 rpm離心1min,棄濾液。
6加入500μl去蛋白液PS。12,000 rpm離心1min,棄濾液。
7加入500μl漂洗液PE。12,000 rpm離心1min,棄濾液。
8加入500μl漂洗液PE。12,000 rpm離心1min,棄濾液。
9 12,000 rpm離心3min,以徹底去除純化柱中殘留的液體。
10將純化柱置于新的1.5 ml離心管中。向純化柱中央處,懸空加入30-100μl洗脫液TE。室溫放置2min。于12,000 rpm離心2min,管底即為高純度基因組DNA。-20℃保存。
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